Risoluzione dei problemi e ottimizzazione della PCR: La guida essenziale

Titolo originale:

PCR Troubleshooting and Optimization: The Essential Guide

Contenuto del libro:

La reazione a catena della polimerasi (PCR) è uno strumento fondamentale nella ricerca scientifica e nei test clinici. La PCR in tempo reale, che combina amplificazione e rilevamento in un unico strumento, è un metodo rapido e accurato per il rilevamento e la quantificazione degli acidi nucleici.

Sebbene la PCR sia una tecnica molto potente, i risultati ottenuti sono validi solo se sono stati utilizzati i controlli appropriati. Inoltre, per generare dati specifici, ripetibili, riproducibili e sensibili è necessaria una corretta ottimizzazione delle condizioni della PCR. Questo libro discute le strategie per preparare controlli e standard efficaci per la PCR, quando dovrebbero essere utilizzati e come interpretare le informazioni che forniscono.

Sottolinea l'importanza dell'ottimizzazione per l'efficienza, la precisione e la sensibilità della metodologia PCR e fornisce indicazioni essenziali su come risolvere i problemi di reazioni inefficienti. Gli esperti di PCR descrivono le tecniche di progettazione e ottimizzazione, discutono l'uso di controlli appropriati, spiegano il significato delle curve standard ed esplorano i principi e le strategie necessarie per una risoluzione efficace dei problemi.

Il libro sottolinea l'importanza della preparazione e della qualità dei campioni, della progettazione dei primer, del controllo degli inibitori, della prevenzione della contaminazione degli ampliconi e dell'ambiente, dell'ottimizzazione della qualità e della concentrazione dei reagenti e della modifica del protocollo di termociclaggio per ottenere sensibilità e specificità ottimali. Inoltre, capitoli specifici trattano la storia della PCR, la scelta della strumentazione, le applicazioni della PCR nella metagenomica, l'analisi di fusione ad alta risoluzione, le linee guida MIQE e la PCR su scala microlitrica.

Le strategie, i suggerimenti e i consigli contenuti in questo volume conciso permetteranno allo scienziato di ottimizzare e risolvere efficacemente i problemi di un'ampia gamma di tecniche, tra cui la PCR, la PCR con trascrittasi inversa, la PCR in tempo reale e la PCR quantitativa. Sarà un libro essenziale per chiunque utilizzi la tecnologia PCR.